摘要：
目的 探讨miR-200c在逆转胃癌细胞紫杉醇耐药中的作用及其机制.方法 构建紫杉醇耐药的胃癌细胞株(AGS/PTX和HGC-27/PTX),采用细胞计数试剂盒(CCK 8)和Transwell小室检测耐药细胞增殖和侵袭能力的变化;采用逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测耐药细胞中miR-200c表达水平的变化.构建敲低或过表达miR-200c的耐药胃癌细胞系,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测miR-200c对糖酵解关键酶LDHA、ENO1、HK2表达影响;运用Seahorse能量代谢分析仪检测miR-200c对质子泵出速率、基础糖酵解、补偿糖酵解、细胞外酸化率、基础呼吸和最大呼吸水平的影响.结果 AGS细胞和AGS/PTX细胞侵袭率分别为(73.00±5.57)％和(300.33±11.50)％,t=30.81,P＜0.001;HGC-27 细胞和 HGC-27/PTX 细胞侵袭率分别为(36.33±3.51)％和(249.00±7.94)％,t=42.44,P＜0.001.AGS 细胞和 AGS/PTX 细胞迁移率分别为(140.00±8.00)％和(445.00±9.64)％,t=42.16,P＜0.001;HGC-27 细胞和 HGC-27/PTX 细胞迁移率分别为(52.00±5.57)％和(313.00±10.82)％,t=37.16,P＜0.001.AGS细胞和 AGS/PTX 细胞 miR200c 表达水平分别为 1.00±0.00 和 0.45±0.13,t=7.36,P＜0.001;HGC-27 细胞和 HGC-27/PTX细胞分别为1.00±0.00和0.40±0.03,t=31.03,P＜0.001.qRT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示,相较于AGS 组,AGS/PTX 组 HK2、ENO1 和 LDHA 表达升高,均 P＜0.05;相较于 HGC-27 组,HGC-27/PTX 组 HK2、ENO1和LDHA表达升高,均P＜0.05.相较于AGS/PTX NC组,AGS/PTX OE组HK2、ENO1和LDHA表达降低,均P＜0.05;AGS/PTX SI 组 HK2、ENO1 和 LDHA 表达升高,均 P＜0.05.相较于 HGC-27/PTX NC 组,HGC-27/PTX OE组 HK2、ENO1 和 LDHA 表达降低;HGC-27/PTX SI 组 HK2、ENO1 和 LDHA 表达升高,均 P＜0.05.相较于 AGS/PTX NC组,AGS/PTX OE组质子泵出速率、基础糖酵解、补偿糖酵解和细胞外酸化率均降低,基础呼吸和最大呼吸均升高;AGS/PTX SI组质子泵出速率、基础糖酵解、补偿糖酵解和细胞外酸化率均升高,基础呼吸和最大呼吸均降低,均P＜0.05.相较于HGC-27/PTX NC组,HGC-27/PTX OE组质子泵出速率、基础糖酵解、补偿糖酵解和细胞外酸化率均降低,基础呼吸和最大呼吸均升高;HGC-27/PTX SI组质子泵出速率、基础糖酵解、补偿糖酵解和细胞外酸化率均升高,基础呼吸和最大呼吸均降低,均P＜0.05.结论 miR-200c通过改变胃癌细胞株侵袭迁移能力,调控糖酵解能力逆转胃癌细胞紫杉醇耐药,恢复其对紫杉醇的敏感性.
