目的：通过筛选在食管鳞状细胞癌（ESCC）患者血清外泌体（Exo）中高表达的微小RNA(miRNA)并分析其与患者临床病理特征的关系，探讨Exo来源的miRNA是否具有成为ESCC临床辅助诊断标志物的潜力。方法：采集2021年12月至2023年6月期间在河北医科大学第四医院收治的45例ESCC初诊患者和50例健康受试者的血清及相关临床资料，分别作为ESCC组和对照组。用基因表达综合数据库（GEO）和qPCR法筛选、鉴定出ESCC患者血清表达升高的候选miRNA-miR-1246，用受试者工作特征曲线分析血清miR-1246对ESCC的诊断效能，Logistic回归分析其与ESCC患者临床特征进展的关系，χ2检验分析其与ESCC患者临床病理特征的关系。分离纯化受试者血清中的Exo并进行表征验证，qPCR检测Exo中miR-1246的表达。常规培养ESCC KYSE150和KYSE30细胞，用Lipofectamine 2000分别将mimics-NC、miR-1246 mimics转染至KYSE150细胞，将inhibitorNC和miR-1246 inhibitor转染至KYSE30细胞，分别记为mimics-NC、miR-1246mimics、 inhibitor-NC和miR-1246-inhibitor组。用mimics-NC和miR-1246 mimics组KYSE150细胞来源的Exo处理KYSE150和KYSE30细胞。用CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell小室实验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力。WB法检测Exo标志物及各组细胞中上皮间皮转化相关蛋白及Tet甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)和细胞黏附分子1(CADM1)蛋白的表达。双萤光素酶报告基因实验验证miR-1246与TET2和CADM1的靶向结合关系。结果：生物信息学筛选ESCC患者血清中差异表达最为显著的miRNA为miR-1246。试验提取患者的血清Exo符合典型Exo表征。Ⅰ～Ⅱ期ESCC患者血清Exo-miR-1246表达水平显著高于健康受试者（P (0.01）；Ⅲ～Ⅳ期ESCC患者的血清Exo-miR-1246水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者（P (0.01）。ROC曲线分析表明，血清中的Exo-miR-1246对ESCC有较高的辅助鉴别诊断价值（P (0.05），并且Exo-miR-1246对ESCC患者临床进展的辅助诊断效能高于CEA与SCC-Ag(P (0.05)，三者联合检测会进一步提高辅助诊断患者分期效能（P (0.01）。Exo-miR-1246可能是ESCC患者临床进展的独立危险因素（P (0.05）。血清Exo-miR-1246表达水平与ESCC的T分期、N分期和临床分期有关联（P (0.01）。过表达miR-1246可促进ESCC细胞增殖、迁移、侵袭、上皮间质转化和抑制凋亡而抑制miR-1246则相反。数据库数据分析发现，TET2和CADM1是miR-1246的靶基因，双萤光素酶报告基因实验证实miR-1246可直接与TET2和CADM1 mRNA结合并抑制其表达（P (0.01）。用过表达miR-1246的细胞来源的Exo处理KYSE150和KYSE30细胞与在其中过表达miR-1246的作用一致。结论:Exo来源的miR-1246具有成为ESCC临床辅助诊断标志物的潜力，其可能通过调控TET2和CADM1的表达水平来影响ESCC的发生发展。