摘要：
目的 探讨c?Met抑制剂AMG?102对喉鳞癌细胞的增殖抑制和放射增敏作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测AMG?102对喉鳞癌细胞株Hep?2和KBV200的增殖抑制作用.采用克隆形成实验分析AMG?102对Hep?2和KBV200细胞的放射增敏作用.采用流式细胞术检测Hep?2和KBV200细胞的凋亡情况.采用Western blot法检测细胞中c?Met／p?Met、凋亡蛋白cleaved caspase 3及下游信号通路蛋白Akt／p?Akt和Erk／p?Erk的表达.利用RNA干扰技术下调细胞中c?Met表达,转染c?Met过表达质粒使细胞中c?Met过表达,分析Hep?2和KBV200细胞对AMG?102的敏感性变化.结果 与KBV200细胞比较,Hep?2细胞对AMG?102更加敏感,半数抑制浓度(IC50)分别为14和9 μmol／L. Hep?2细胞中c?Met和p?Met蛋白的相对表达量分别为194.48±0.57和177.76±1.53,均明显高于KBV200细胞(分别为171.24±1.00和115.37±0.56,均P＜0.001). AMG?102作用于肝细胞生长因子(HGF)处理后的KBV200细胞,可使其p?Met蛋白的相对表达水平明显降低(P＜0.001).与二甲基亚砜(DMSO)组比较,AMG?102联合照射可明显增加Hep?2细胞的放射敏感性( SER＝1.28,P＜0.001);而AMG?102对KBV200细胞的放射敏感性影响很小(SER＝1.18,P＝0.002).与4 Gy照射组和5 μmol／L AMG?102处理组比较,4 Gy照射+5 μmol／L AMG?102处理组Hep?2细胞的凋亡率明显增加,cleaved caspase?3蛋白的表达水平明显升高.而各处理组 KBV200 细胞的凋亡率和 cleaved caspase?3蛋白的表达水平无明显变化.与DMSO处理组比较,4 Gy照射组、5 μmol／L AMG?102处理组和4 Gy照射+5 μmol／L AMG?102处理组Hep?2细胞中p?Met、p?Akt和p?Erk蛋白的表达水平下降,其中4 Gy照射+5 μmol／L AMG?102处理组中p?Met、p?Akt和p?Erk蛋白的表达水平比4 Gy照射组和5 μmol／L AMG?102处理组更低.但在KBV200细胞中,各处理组的p?Met、p?Akt和p?Erk蛋白表达水平均未明显降低.照射前及照射后30 min、1 h、4 h、8 h、24 h Hep?2细胞中p?Met蛋白的相对表达水平分别为99.89±0.61、138.62±1.00、163.07±5.00、87.80±1.85、90.67±0.65和94.09±1.41,照射后30 min和1 h,p?Met蛋白表达水平有所增加(均P＜0.001),但照射后4～24 h,p?Met蛋白表达水平明显下降(均P＜0.05),而KBV200细胞中p?Met蛋白的表达水平不随照射时间的变化而变化( P＞0.05).干扰c?Met蛋白表达后,Hep?2细胞对AMG?102的敏感性下降,而KBV200细胞对AMG?102的敏感性无明显变化(P＞0.05).进一步检测显示,与siRNA阴性对照组比较,c?Met?siRNA组Hep?2细胞的放射敏感性呈增加趋势(SER＝1.07,P＝0.068).质粒诱导c?Met过表达后的两种细胞经10 μmol／L AMG?102处理,KBV200细胞的增殖率为(60.05±3.23)%,明显低于空白对照组和siRNA阴性对照组[分别为(90.08±1.04)%和(90.12±1.01)%,P＜0.001],提示过表达c?Met蛋白后,KBV200细胞对AMG?102的敏感性升高,而Hep?2细胞对AMG?102的敏感性下降.进一步检测显示,c?Met过表达的KBV200细胞的放射敏感性呈下降趋势(SER＝0.7,P＝0.005).结论 c?Met抑制剂AMG?102对c?Met过表达的喉鳞癌细胞的增殖抑制作用明显、放射增敏作用强,表明具有c?Met过表达的喉鳞癌应用抗c?Met受体的分子靶向治疗更有效.
