目的:观察并比较银翘散在不同煎煮时间下体外抑制甲型流感病毒FM1株的作用,及其含药血清对FM1刺激小鼠巨噬细胞Ana-1株Toll样受体及其下游信号转导通路的影响,探讨银翘散的抗病毒作用及其最佳煎煮时间.方法:采用血凝试验观察银翘散在不同煎煮时间、不同浓度下体外抑制流感病毒及对流感病毒感染鸡胚的预防和治疗作用;用FM1刺激巨噬细胞Ana-1,同时给予不同煎煮时间的银翘散含药血清进行干预,培养24h后提取细胞RNA,应用实时定量PCR方法测定TLR3、TLR4及其下游信号转导通路MyD88、TRAF-6、TRAM和TRIF mRNA的表达.结果:与病毒对照组比较,银翘散在不同煎煮时间、不同浓度下均可直接抑制FM1株的活性,其抑制作用时间从1h持续到24h,其中以3 min高、中浓度组抑制作用最强;银翘散各组对流感病毒感染鸡胚均有一定的预防和保护作用,其中以3 min高、中浓度组和6 min高浓度组的作用最强(P＜0.05).银翘散在不同煎煮时间下的含药血清均能显著降低FM1诱导的巨噬细胞TLR3、TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM和TRIF的高表达(P＜0.05),尤以3 min高、中、低浓度组和6 min高浓度组最为显著(P＜0.05).结论:银翘散在不同煎煮时间、不同浓度下均可有效抑制甲型流感病毒,尤以3～6 min高浓度组的作用最强;不同煎煮时间下的银翘散均能阻断TLR3和TLR4的高表达,并能阻断TLR4信号转导的MyD88依赖和非依赖途径,尤以3 min和6 min组最显著,由此推断银翘散的最佳煎煮时间可能为煮沸后3 ～6 min.