资源类型:
文章类型:
机构:
[1]河北大学生命科学学院,保定
[2]College of Osteopathic Medicine, Pomona, USA
[3]河北医科大学第四医院,石家庄
河北医科大学第四医院
胸一科
临床科室
出处:
ISSN:
关键词:
肺癌
噬菌体展示
cDNA文库
吸烟者
摘要:
目的:为筛选吸烟人群中早期肺癌肿瘤标志物,构建吸烟者肺癌组织T7噬菌体展示cDNA文库。方法:用RNeasy Mini Kit提取吸烟者肺癌组织总RNA,分离纯化mRNA,逆转录合成双链cDNA,经末端修饰、定向EcoRI/HindIII接头连接、接头消化,使其两端分别带有EcoRI和HindIII粘性末端。用Mini Column分离cDNA片段,收集300 bp以上的双链cDNA,与T7Select 10-3b载体连接,体外包装后,以BLT5615为受体菌得到吸烟者肺癌组织T7噬菌体展示cDNA文库。结果:经测定,库容为1.35 × 106 pfu,扩增后文库滴度为4.4 × 1010 pfu/ml。PCR鉴定从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑,重组率为97%,重组体中91%的插入片段长度>300 bp。结论:成功构建了吸烟者肺癌组织T7噬菌体cDNA文库,为下一步筛选吸烟人群中早期肺癌肿瘤标志物奠定基础。
第一作者:
第一作者机构:
[1]河北大学生命科学学院,保定
通讯作者:
通讯机构:
[1]河北大学生命科学学院,保定
[2]College of Osteopathic Medicine, Pomona, USA
推荐引用方式(GB/T 7714):
薛雯,钟理,康现江,等.吸烟者肺癌组织T7噬菌体cDNA文库构建[J].生物医学.2012,2(02):15-18.