摘要：
目的 采用反义RNA技术,构建人FasL反义RNA重组逆转录病毒载体.以FasL表达阳性的人食管癌细胞株TE11为模型,研究反义RNA重组逆转录病毒表达载体对细胞FasL的阻断作用.方法 将人FasL全基因序列的DNA片段反向插入逆转录病毒pLXSN质粒上的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ位点间,建立重组质粒pL(FasL-AS)SN.将pL(FasL-AS)SN导入包装细胞PA317中,经G418筛选后收获培养上清,转染TE11细胞,建立TE11-hFasL-AS细胞系.用PCR技术检测pL(FasL-AS)SN中目的基因FasL的插入及其在TE11细胞中的整合;用RT-PCR法检测TE11细胞经重组病毒感染前后FasL mRAN表达量的变化;采用流式细胞仪检测TE11和TE11-hFasL-AS细胞FasL的表达及其对U937细胞凋亡的诱导.结果 将pL(FasL-AS)SN转染TE11细胞后,FasL反义RNA已整合至TEll细胞(TE11-hFasL-AS)中;TE11-hFasL-AS细胞FasL mRAN及蛋白的表达水平均显著下降(P＜0.01);与TE11-hFasL-AS细胞混合培养后,U937细胞凋亡率明显低于未转染组(P＜0.01).结论 成功构建了人FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体,用该载体转染的TE11细胞中FasL的表达水平明显受抑,为Fas/FasL参与的体内许多病理进程的机制研究及临床应用提供实验基础.
