摘要：
目的制备和纯化兔抗小鼠β-catenin抗体,分析其在乳腺癌细胞和乳腺良、恶性组织中的表达.方法应用重组小鼠β-catenin蛋白,常规免疫雄性新西兰兔制备抗β-catenin抗体,并用盐析法和离子交换层析技术进行纯化,用免疫印迹法(Western blot)检测β-catenin抗体的纯度和特异性以及乳腺癌细胞株MCF-7和T-47D中β-catenin蛋白的表达.用免疫组织化学SP法检测β-catenin在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的不同表达.结果用重组小鼠β-catenin蛋白免疫新西兰兔6周后,应用间接ELISA法检测静脉血中β-catenin抗体效价为1:204 800(A450nm=1.01).将β-catenin经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为92 000的蛋白条带,与文献报道相符.用抗β-catenin血清做Western blot分析显示,在Mr为92 000处有1条明显的区带,证明是抗β-catenin特异性抗体.从人乳腺癌细胞株MCF-7和T-47D提取全细胞蛋白,经用所制备的β-catenin抗体反应,均观察到β-catenin蛋白的表达.人乳腺组织切片经抗β-catenin抗体免疫组化染色,在正常乳腺组织细胞膜中可见棕黄色颗粒,而在乳腺癌组织的细胞浆或细胞核中可见棕黄色颗粒.结论制备了高效价、特异性的兔抗β-catenin抗体.用该抗体检测证实,正常乳腺组织β-catenin表达在细胞膜中,而乳腺癌组织β-catenin则在细胞浆或细胞核中表达,提示乳腺癌发生后β-catenin由细胞膜易位入细胞浆或细胞核中表达,这有助于乳腺癌的临床早期诊断.
