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◇ 北大核心
文章类型：
机构：
[1]河北医科大学第四医院科研中心,河北,石家庄,050011
医技科室
科研中心
河北医科大学第四医院
[2]美国MD技术公司,Mo,63021,美国
出处：
ISSN：
关键词：
Syk
分离纯化
凝胶层析
Sf21细胞
摘要：
目的:从转染syk基因的Sf21细胞中提取、纯化免疫相关因子Syk蛋白.方法:将syk基因转染Sf21细胞,于28℃培养48 h,收集细胞,用超声波破碎仪裂解细胞,提取裂解液中总蛋白,用Yellow-3凝胶和Toyopearl-AF-Heptin-650M凝胶层析柱分离、纯化.层析液中的Syk蛋白存在和性质,用SDS-PAGE、免疫印迹实验和等电聚焦实验鉴定.结果:从25亿个Sf21细胞裂解液中提取了含有Syk的225 mg蛋白质.经Yellow-3凝胶层析分离,得到两个亚种的Syk蛋白,相对分子质量(Mr)均为72×103.进一步用Toyopearl-AF-Heptin-650M凝胶层析纯化后,得到两个纯的Syk蛋白,SDS-PAGE、免疫印迹实验结果显示,两种Syk的Mr均为72×103,与Syk的理论相对分子质量吻合.但等电聚焦实验显示,这两种Syk蛋白成分具有不同的pI值.结论:从25亿个转染syk基因的Sf21细胞中纯化出8 mg Syk蛋白,纯度高于95%.这两种Syk的Mr虽然相同,但具有不同的pI值,是两个亚种.这些Syk可用于研究Syk的作用机制、抗Syk抗体的制备和Syk诊断试剂盒的制备等.
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第一作者：
第一作者机构：
[1]河北医科大学第四医院科研中心,河北,石家庄,050011
推荐引用方式(GB/T 7714)：
单保恩,董青,李宏芬,等.非受体型酪氨酸激酶-Syk蛋白的提取与纯化[J].细胞与分子免疫学杂志.2004,20(2):230-233.
