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摘要：
本发明涉及一种食管胃结合部平滑肌细胞的酶消化法原代培养及鉴定方法，包括以下步骤：获取食管胃结合部的平滑肌组织肌条；将所述平滑肌组织肌条用消化液消化，得到平滑肌组织细胞悬液；将所述平滑肌组织细胞悬液置于预铺左旋多聚赖氨酸的培养容器中，培养至贴壁细胞占培养容器底部90％以上或局部细胞生长拥挤。本发明对食管胃结合部平滑肌细胞的酶消化法原代培养方法简单、完善而有效，鉴定方法可以鉴定出平滑肌细胞特有的表型。
主权项：
1.一种食管胃结合部平滑肌细胞的酶消化法原代培养方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤a、获取食管胃结合部的平滑肌组织肌条；步骤b、将所述平滑肌组织肌条用消化液消化，得到平滑肌组织细胞悬液；具体包括以下操作：将步骤a所得平滑肌组织肌条剪成平面尺寸为5～8mm×5mm的组织块；以PBS＋抗生素混合液漂洗，再以PBS漂洗；以DMEM/F-12原液溶解消化酶配制成消化液，将所述组织块置于装有所述消化液的容器中，吸取部分所述消化液注入所述组织块内使所述组织块充盈饱满；置于4℃环境中进行消化14～24h后，加入新生牛血清，以尖端抛光的吸管吹打；过滤，得到平滑肌组织细胞悬液；所述消化酶为胶原酶II，所述胶原酶II的浓度为125~200CDU/mg，所述胶原酶II在所述消化液中的浓度为0.5~1.0mg/ml；步骤c、将所述平滑肌组织细胞悬液置于预铺左旋多聚赖氨酸的培养容器中，培养至贴壁细胞占培养容器底部90%以上或局部细胞生长拥挤。
