摘要：
目的 蟾蜍灵(Bufalin)是中医抗癌药物蟾酥的有效成分之一,但其抗肿瘤的机制并不十分清楚.本研究通过分析不同浓度Bufalin对食管癌TE13细胞株迁移距离、MEK1/2及其活化形式P-MEK1/2和基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)表达的影响,初步探讨Bufalin抑制食管癌TE13细胞迁移能力的作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethyhhiazol-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]法测定细胞药物毒性,细胞划痕实验分别测量不同浓度(0、10、25、50和100 nmol/L)Bufalin处理组食管癌TE13细胞的迁移距离.蛋白质印迹法及免疫细胞化学法检测MEK1/2和P-MEK1/2蛋白的表达.逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MMP-2、MMP-9 mRNA的表达情况.结果 MTT法结果显示,Bufalin药物最大无毒浓度(TC0)为100 nmol/L.细胞划痕实验结果显示,不同浓度Bufalin处理组在划痕36 h后与对照组相比迁移的距离不同,随着Bufalin浓度的增加,细胞迁移距离下降,100 nmol/L迁移距离最小(F=243.163,P＜0.01),Bufalin能有效抑制食管癌细胞迁移距离.蛋白质印迹法及免疫细胞化学检测结果显示,Bufalin对MEK1/2蛋白的表达无影响,但能显著抑制其活化形式P-MEK1/2的表达,并呈剂量依赖性,随Bufalin浓度的升高(0、10、25、50和100 nmol/L),P-MEK1/2相对表达量逐渐下降,分别为0.710±0.006、0.676±0.010、0.656±0.010、0.599±0.020和0.521±0.021,F=76.369,P＜0.01.P-MEK1/2阳性细胞数随着Bufalin浓度的升高而减少,分别为(80.330±1.905)％、(68.407±2.219)％、(67.297±1.797)％、(52.617±2.368)％和(26.97±2.912)％,F=243.348,P＜0.01.RT-PCR结果显示,随着Bufalin药物浓度的升高,MMP-2 mRNA相对表达量分别为0.772±0.010、0.725±0.019、0.663±0.015、0.582±0.019和0.519±0.019,F=112.990,P＜0.01;MMP-9 mRNA相对表达量分别为0.783±0.013、0.740±0.010、0.703±-0.006、0.601±0.017和0.531±0.010,均低于对照组,F=179.417,P＜0.01.结论 Bufalin可能通过下调MEK1/2的活性,从而抑制食管癌TE13细胞的迁移能力.
