摘要：
制备和纯化兔抗小鼠β-catenin抗体,分析其在结肠癌诊断中的应用价值.应用重组小鼠β-catenin蛋白,常规免疫雄性新西兰兔制备抗β-catenin抗体,并用盐析法和离子交换层析技术进行纯化,用免疫印迹法(Western blot)检测β-catenin抗体的纯度和特异性以及结肠癌细胞系SW48和HCT116中β-catenin蛋白的表达.用免疫组化SP法检测β-catenin在正常结肠组织和结肠癌组织中的不同表达.结果,用重组小鼠β-catenin蛋白免疫新西兰兔7周后,应用间接ELISA法检测静脉血中β-catenin抗体效价为1:204 800(A450=1.01).将β-catenin经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为92 000的蛋白条带.与文献报道相符.用抗β-catenin血清做Western blot分析显示,在Mr为92000处有1条明显的区带,证明是抗β-catenin特异性抗体.从人结肠癌细胞株SW48和HCT116提取全细胞蛋白,经用所制备的β-catenin抗体反应,均可观察到β-catenin蛋白的表达.人结肠组织切片经抗β-catenin抗体免疫组化染色,在正常结肠组织细胞膜中可见棕黄色颗粒,而在结肠癌组织的细胞浆中可见棕黄色颗粒.制备了高效价、特异性的兔抗β-catenin抗体.用该抗体检测证实,正常结肠组织β-catenin表达在细胞膜中,而结肠癌组织β-catenin则在细胞浆中表达.提示结肠癌发生后β-catenin由细胞膜易位入细胞浆中表达,这可作为结肠癌的诊断的参考指标.
