【目的】基于细胞水平观察小檗碱对阿霉素诱导心肌细胞沉默信息调节因子2同源蛋白1（SIRT1）/p66Shc通路的影响，探讨小檗碱抗阿霉素所致心肌毒性作用的机制。【方法】应用阿霉素（1μmol/L）处理人心肌细胞系AC16建立阿霉素心肌毒性模型。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定细胞存活率，二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）染色荧光显微镜照像测定细胞活性氧簇（ROS）水平，罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照像测定线粒体膜电位（MMP），荧光染料Rhod2-AM（分子探针）测定线粒体Ca2+浓度（[Ca2+]m），蛋白免疫印迹（Western Blot）法测定细胞SIRT1、p66Shc及凋亡蛋白Bax的表达水平。【结果】用1μmol/L小檗碱预处理可明显抑制1μmol/L阿霉素引起的AC16心肌细胞毒性作用，使细胞存活率升高，表现为抑制阿霉素引起的细胞内ROS生成增多、抑制阿霉素致细胞凋亡（使凋亡蛋白Bax表达下调）和减轻线粒体损伤。阿霉素处理的AC16心肌细胞中p66Shc表达增强且SIRT1蛋白表达下降；预先加用小檗碱组中，阿霉素上调p66Shc及下调SIRT1表达的效应显著减弱；而1μmol/L EX527（SIRT1抑制剂）预处理则加重阿霉素引起的AC16细胞损伤，这种细胞损伤未能被小檗碱预处理所改善。【结论】小檗碱可通过SIRT1介导的p66Shc抑制保护AC16心肌细胞对抗阿霉素诱导的心肌毒性。