[目的]探讨微小RNA（miR）-9-5p在胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC）中表达及影响其生物学行为的机制。[方法]实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）测定40例PDAC与正常人胰腺细胞系HPDE6-C7中miR-9-5p的表达。miR-9-5p模拟物转染PDAC细胞株PANC-1；甲基噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性；划痕实验、Transwell侵袭实验测定细胞侵袭、迁移能力。qPCR及蛋白印迹实验检测RhoA、ROCK1、PCNA、CyclinD1、MMP-2、MMP-9及p21表达。双荧光素酶报告基因分析实验检测miR-9-5p对RhoA的调控功能。[结果]（1）临床样本中miR-9-5p在PDAC组织中的表达显著性低于癌旁组织（0.34±0.08 vs 1.01±0.24,t=13.222,P＜0.001）。miR-9-5p表达降低与胰腺癌淋巴结转移、肿瘤分期存在相关性。（2）miR-9-5p在胰腺癌细胞系PANC-1中表达明显低于正常人胰腺细胞系HPDE6-C7（0.28±0.04 vs 0.53±0.05,t=7.204,P=0.019）。（3）双荧光素酶报告基因分析结果表明，野生型RhoA的荧光素酶活性在转染miR-9-5p模拟物后较对照组降低（0.99±0.08 vs0.22±0.02,P＜0.001）。（4）转染后，转染组细胞增殖活性降低（0.53±0.07 vs 1.09±0.11、1.13±0.08,P均＜0.001），侵袭距离减少（0.28±0.07μm vs 0.66±0.05μm、0.64±0.07μm,P均＜0.001），迁移细胞数减少（32.83±2.99 vs 70.00±4.29、65.67±5.79,P均＜0.001）。（5）与阴性对照组及Scramble组比较，miR-9-5p模拟物转染组RhoA、ROCK1、PCNA、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达显著性降低，p21表达升高（P均＜0.05）。[结论]胰腺导管腺癌细胞中miR-9-5p表达降低；过表达miR-9-5p后能明显抑制PANC-1细胞的体外增殖、侵袭及迁移，其调控机制可能与RhoA信号通路相关。