摘要：
目的 近年来研究显示,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)与食管鳞癌的发生、发展密切相关,为探索食管鳞癌的诊治提供了新靶点.本研究旨在阐明lncRNA P5848在食管鳞癌组织及细胞中的表达,并深入探讨其对细胞增殖的影响.方法 利用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测16例食管鳞癌组织(食管癌组)和配对癌旁组织(癌旁组织组)、5例食管活检黏膜上皮组织(正常对照组)以及人食管上皮细胞系HEEC、食管鳞癌细胞系EC-109、EC-9706和KYSE-150中P5848的表达水平;采用质粒转染使P5848在食管鳞癌细胞系中过表达;同时应用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法及磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法检测细胞增殖率;碘化丙啶细胞周期检测试剂盒检测细胞周期变化情况;Caspase-3活性试剂盒检测细胞凋亡情况;应用qRT-PCR及蛋白质印迹法检测Bcl-2、p53及Caspase-3的mRNA与蛋白质的表达变化.结果 食管鳞癌组织中P5848表达量为0.567(0.483,0.667),低于癌旁组织的0.975(0.529,1.317)和正常对照组的1.007(0.772,1.150),差异均有统计学意义(Z=-9.688,P=0.011;Z=-13.4,P=0.015).EC-109、EC-9706和KYSE-150细胞中P5848的表达水平分别为0.562±0.056、0.509±0.095和0.629±0.118,与HEEC细胞(1.054±0.200)相比降低,差异有统计学意义(F=4.605,P=0.005;F=5.111,P=0.002;F=3.963,P=0.007).质粒转染过表达P5848可上调食管鳞癌细胞中P5848的表达水平,过表达P5848后,MTT和SRB检测结果显示,3种细胞的增殖能力降低(F值分别为9.546、13.260、7.394和3.838、9.705、4.678,均P＜0.01).过表达P5848降低了S期细胞比率(F值分别为4.673、3.189和4.146,均P＜0.05),同时增加G1期细胞比率(F值分别为8.217、6.944和5.074,均P＜0.01),提示P5848可能通过抑制细胞从G1期向S期转换,从而抑制食管鳞癌细胞增殖能力.此外,P5848过表达可使细胞凋亡蛋白Caspase-3和p53的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl 2表达减少,均P＜0.05.结论 过表达P5848能够引起食管鳞癌细胞生物学行为的改变,抑制细胞增殖诱导其凋亡,从而在一定程度上起到抑制肿瘤发生、发展的作用.
