摘要：
目的:通过体内外实验探讨锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)过量表达对食管癌TE-1细胞增殖的影响.方法:采用病毒感染法将不同剂量构建有MnSOD基因的重组质粒转入食管癌TE-1细胞,建立中、高表达MnSOD的TE-1细胞pLenti6-mMnSOD/TE-1 (TE-1Mm)和pLenti6-hMnSOD/TE-1 (TE-1Mh);采用 RT-PCR法及Western印迹法检测转染MnSOD重组质粒的TE-1细胞中mRNA和蛋白水平的表达变化情况;应用平皿克隆形成实验及FCM法观察细胞增殖、凋亡和周期变化的情况;将MnSOD转染后的TE-1细胞接种到裸鼠皮下检测成瘤及肿瘤牛长情况,采用免疫组织化学和Western印迹法检测移植瘤中MnSOD蛋白的表达水平.结果:建立稳定表达MnSOD蛋白的TE-1细胞株;RT-PCR及Western印迹法检测结果均证实,感染不同剂量的MnSOD重组质粒的TE-1细胞中,MnSOD的表达水平随感染剂量的增加而上升;细胞平皿克隆检测结果提示,TE-1Mm和TE-1Mh细胞的集落形成能力为(23.0士2.7)%和(45.3士4.5)%,分别低于和高于TE-1细胞的(34.7士4.2)%及TE-ln细胞的(33.7士4.7),实验组间比较及与对照组进行比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);Annexin V-PI双染 FCM检测结果显示,TE-1Mm和TE-1Mh细胞的早期细胞凋亡率为(10.6士1.0)%和(1.0士0.1),分别高于和低于对照组TE-1细胞的(2.6士0.2)%和TE-1n细胞的(2.5士0.3)%(P＜0.05);细胞周期检测结果显示,MnSOD过量表达使G,/G,期细胞数在TE-1Mm细胞中增多,而在TE-1Mh细胞中减少,Gz/M期和S期细胞数则在TE-1Mm细胞中减少,在TE-1Mh细胞中增多;与亲本TE-1细胞和感染空载体TE-In细胞相比,TE-1Mm细胞处在增殖期细胞少,而TE-lMh细胞处在增殖期细胞多(P＜0.05).TE-1Mm细胞接种裸鼠后,肿瘤生长慢,体积小,而接种TE-1Mh细胞则相反,肿瘤生长速度明显加快;瘤组织中的MnSOD蛋白的表达水平,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:MnSOD过量表达通过改变细胞周期和凋亡,对食管癌TE-1细胞的增殖和移植瘤的生长均表现为促进和抑制增殖的双向作用.
