摘要：
目的 构建锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因重组慢病毒表达载体,并观察其对食管癌细胞增殖的影响.方法 采用慢病毒转染法将MnSOD重组质粒转染食管癌TE-1细胞,建立MnSOD中、高表达的稳定转染细胞(TE-1Mm、TE-1Mh)及空载体细胞株(TE-1Mn细胞).逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学法及Western blot检测MnSOD在食管癌TE-1细胞中的表达;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验、平皿克隆形成实验、Annexin V-FTTC/PI双染实验及流式细胞术(FCM)研究MnSOD过表达在体外对TE-1细胞的影响.结果 RT-PCR检测显示,转染后的TE-1细胞含有不同表达水平的MnSOD.免疫细胞化学及Western blot显示,TE-1Mm细胞和TE-1Mh细胞含有不同表达水平的MnSOD蛋白.MTT法显示,与对照细胞(TE-1细胞、TE-1Mn细胞)相比,培养48 h者TE-1Mm细胞的存活率下降,TE-1Mh细胞的存活率升高,组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05).TE-1Mm细胞平皿克隆集落形成能力为(23.0±2.7)%,TE-1Mh细胞为(45.3±4.5)%,而与TE-1细胞[(34.7±4.2)%]和TE-1Mn细胞[(33.7±4.7)%]相比,差异有统计学意义(P＜0.05).TE-1Mm细胞早期凋亡率为(10.6±1.0)%,TE-1Mh细胞为(1.0±0.1)%,与TE-1细胞[(2.6±0.2)%]和TE-1Mn细胞[(2.5±0.6)%]相比,差异有统计学意义(P＜0.05).TE-1Mm和TE-1Mh细胞线粒体凋亡荧光指数分别为0.948±0.019和1.076±0.022,与TE-1细胞(1.000±0.022)和TE-1Mn细胞(0.997±0.023)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).TE-1Mm细胞内活性氧荧光指数(0.859±0.040)低于TE-1细胞(1.000±0.042)和TE-1Mn细胞(1.002±0.047),但高于TE-1Mh细胞(0.763±0.039),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 MnSOD过表达对食管癌TE-1细胞增殖具有抑制和促进的双向作用.
