摘要：
目的通过基因转导和药物诱导,建立稳定表达P-gp的细胞系,用于筛选特异性逆转P-gp的药物.方法 经RT-PCR反应得到小鼠肿瘤细胞P-gp DNA,转化大肠杆菌,构建并将质粒DNA转导逆转录病毒载体中,进而感染B-MD-C1细胞.采用Northern印迹法和流式细胞技术检测细胞P-gp mRNA和P-gp分子的表达;以MTT法分析细胞的增殖活性;应用药物聚集和排放实验检测其生物学活性.结果成功构建了稳定表达特异性P-gp基因和P-gp分子的B-MD-C1(ADR+/+)细胞系.经阿霉素诱导,B-MD-C1(ADR+/+)细胞P-gp的表达明显增高,在阿霉素增加至12 000ng/mL时,仍有80%的细胞保持良好增殖状态,而B-MD-C1(wt)细胞在1 000ng/mL时100%细胞死亡.B-MD-C1(ADR+/+)较(wt)细胞对MD-123有较低的聚集量和较高的排放量,加入P-gp逆转剂Verapamil后,B-MD-C1(ADR+/+)细胞MD-123聚集量增加,药物外排作用消失.结论 B-MD-C1(ADR+/+)细胞系具有较强的药物耐受性,可用于筛选特异性逆转P-gp的药物,Verapamil可逆转P-gp耐药性,具有Verapamil特性者可视为具有逆转P-gp耐药性.
