摘要：
目的:观察哇巴因(ouabain,OUA)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响,并探讨低浓度OUA是否可通过Na+,K+-ATPase的信号转导途径升高[Ca2+]i.方法:分离豚鼠心室肌细胞,激光共聚焦显微镜术测定单个心室肌细胞[Ca2+]i的荧光密度,另用不同浓度OUA孵育急性分离的豚鼠心室肌细胞后,分别取其沉淀用Western印迹检测观察OUA对酪氨酸蛋白(Src)磷酸化的影响.结果:在正常台氏液及无钙台氏液中,OUA(10-9,10-8,10-7,10-6mol·L-1)均可浓度依赖性地升高细胞内钙浓度(P《0.05或0.01),且在正常台氏液中升高更为显著(P《0.05).蛋白酪氨酸激酶抑制剂三羟异黄酮(genistein,GST)(1、10、50、100 μmol·L-1)可浓度依赖性地抑制正常台氏液中的OUA效应.磷酸化Src包括相对分子质量120 000和70 000两个条带,各剂量OUA(10-4,10-6,10-8mol·L-1)均能使Src的两个磷酸化条带的密度较阴性对照组显著升高(P＜0.05),而GST(100 μmol·L-1)可显著抑制OUA的升高效应.结论:低浓度OUA可能通过使酪氨酸蛋白磷酸化,激活OUA/Na+,K+ATPase/Src信号转导通路,促使钙通道开放及内钙释放,从而升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度.
