摘要：
目的 观察RNA干扰细胞周期检测点激酶CHK1和CHK2表达对食管癌细胞照射后G2期阻滞的影响.方法 CHK1和CHK2基因各选择4段序列分别设计合成短发卡状RNA(shRNA),分别与pENTRTM/U6质粒连接后转染Eca109食管癌细胞.采用Western blotting检测CHK1和CHK2蛋白表达,RT-PCR检测其mRNA表达,流式细胞仪检测5 Gy照射后细胞周期变化,克隆法检测5 Gy照射后细胞存活率.结果 CHK1和CHK2基因各成功建立4个序列的shRNA连接质粒,转染Eca109细胞后均使其蛋白表达降低.用抑制效果最好的CHK1和CHK2 shRNA转染Eca109细胞后,其mRNA表达下降;在转染后72 h,子一代细胞CHK1和CHK2蛋白仍明显降低,并使5 Gy照射后1 h的CHK2-T68磷酸化水平降低,而对CHK1-S345磷酸化水平无明显影响.CHK1shRNA转染的Eca109细胞在5 Gy照射后12 h时,明显减轻G2期阻滞程度;转染后72 h和5 Gy照射后12 h,子一代Eca109细胞G2期阻滞仍明显低于单纯5 Gy照射组;而CHK2 shRNA转染不影响照射后G2期阻滞.CHK1和CHK2 shRNA转染可降低5 Gy照射后Eca109细胞存活率.结论 shRNA转染对CHK1和CHK2蛋白表达的抑制效应至少可以持续3 d,且可传递给子代细胞;CHK1 shRNA转染可以减轻Eca109细胞照射后G2期阻滞,增加放射敏感性.
