摘要：
目的 研究抑制MDC1基因的蛋白表达对裸鼠移植瘤的影响,观察裸鼠肿瘤病理组织学和细胞生物学特征的变化.方法 根据MDC1 mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列和阴性对照序列,并与载体pSIH1-H1-copGFP形成重组质粒,RT-PCR和蛋白印迹法测定MDC1 mRNA和蛋白表达水平,筛选出阴性转染组(ECA109-N)、MDC1转染组(ECA109-M)细胞,将其接种裸鼠分为ECA109-M、ECA109-N、ECA109组,上述各组又分为60C0 γ射线照射组和未照射组.观察各组裸鼠移植瘤照射后体积变化,蛋白印迹法检测移植瘤组织中CHK1、CHK2、CHK2T68表达水平,流式细胞仪分析裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和细胞凋亡情况.多组样本均数间的比较采用方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验.结果 成功构建pMDC1-shRNA质粒并转染ECA109细胞,获得稳定转染细胞ECA109-M.所有接种裸鼠均成活并在接种后1周左右可见裸鼠爪下形成移植瘤,各组之间肿瘤大小相近(P＞0.05).15Gy照射后单纯照射组和空载照射组裸鼠的肿瘤生长速度慢于未照射组(P＜0.05),其中MDC1转染联合照射组较阴性对照组和空白组肿瘤相对生长速率降低(P＜0.05),生长抑制率升高(P＜0.05).MDC1转染联合照射组q值为1.36.MDC1转染联合照射组裸鼠体内CHK1和CHK2的蛋白表达水平相近(P＞0.05),但CHK2T68磷酸化水平明显降低(P＜0.05),各组裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和凋亡细胞比例也相近(P＞0.05).结论 RNA干扰降低MDC1蛋白表达后可有效增强细胞的放射敏感性,表现为抑制了60Co γ射线照射后裸鼠移植瘤的生长速度.
