摘要：
目的:观察miRNA靶向沉默P65基因对人三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)MDA-MB-231细胞体外黏附和侵袭的影响及其可能机制.方法:设计3对针对P65基因的特异性miRNA(P65miRNA-1、P65miRNA-2和P65 miRNA-3),转染MDA-MB-231细胞,Western blotting检测P65蛋白的表达,筛选沉默效果最好的miRNA进行后续实验.体外黏附实验和Transwell小室实验检测P65miRNA转染前后MDA-MB-231细胞的黏附和侵袭.RT-PCR检测MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9 mRNA的表达水平,明胶酶谱法检测MDA-MB-231细胞中MMP-2、MMP-9的酶活性.结果:成功构建重组质粒P65miRNA-1、P65miRNA-2和P65miRNA-3,前两者转染MDA-MB-231细胞后抑制P65蛋白表达80%以上.P65miRNA-1和P65miRNA-2转染对MDA-MB-231细胞的黏附无明显影响(P＞0.05),但显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭(0.371±0.039、0.309±0.046vs0.698±0.065,P＜0.05).P65miRNA-1和P65miRNA-2转染沉默P65表达后,MDA-MB-231细胞MMP-2 mRNA(0.281±0.018、0.478±0.023 vs 1.056±0.072、1.128±0.059,P＜0.05)和MMP-9 mRNA表达(0.193 +0.013、0.371±0.035 vs 1.206±0.069、1.089±0.057,P＜0.05)及其活性均显著下调.结论:miRNA靶向沉默P65的表达能抑制人TNBC MDA-MB-231细胞的体外侵袭,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性有关.
